第五人格中有两种阵营的角色：监管者和求生者。监管者负责追击和捕捉求生者，而求生者则需要团队协作，破解密码机并逃离庄园。每个角色都有独特的背景故事和技能设定，让游戏充满了策略性和趣味性。
监管者阵营中，厂长是最基础的角色之一，他的技能可以放置傀儡进行传送，适合新手练习追击技巧。红蝶则是一位灵活的女性监管者，能瞬间移动拉近距离，给求生者带来不小的压力。杰克则以优雅的雾刃攻击和独特的公主抱动作闻名，适合喜欢高速追击的玩家。雕刻家通过操控雕像远程攻击和封堵走位，玩起来很有战术性。
医生自带医疗针，可以治疗自己和队友，适合团队辅助。机械师能操控傀儡协助修机或救援，但自身较为脆弱，需要队友保护。园丁的技能是拆除监管者的处刑椅，为队友争取逃脱时间，不过在后期要小心监管者的针对。冒险家可以缩小身体藏匿，适合喜欢隐蔽行动的玩家。前锋则凭借橄榄球冲刺技能，能在关键时刻救人或者牵制监管者。
祭司可以放置传送门实现远距离移动，帮助团队快速转点。调香师利用香水回溯状态，在受伤后恢复健康，玩起来很有操作感。佣兵依靠护肘冲刺灵活走位，但修机速度较慢，更适合救人位。而盲女虽然视野受限，但能透视密码机和监管者位置，为团队提供关键信息。
